Koronawirus zespołu ostrej biegunki świń (SADS-CoV) jest nowo odkrytym koronawirusem chorobotwórczym jelit świń, który może powodować wodnistą biegunkę u nowonarodzonych prosiąt i powodować znaczne straty ekonomiczne w przemyśle trzody chlewnej.Obecnie nie ma odpowiedniej metody serologicznej do oceny skuteczności infekcji i szczepionki SADS-CoV, dlatego istnieje pilna potrzeba zastosowania skutecznego testu immunoenzymatycznego (ELISA) w celu uzupełnienia tego niedoboru.Tutaj skonstruowano rekombinowany plazmid eksprymujący białko wypustek SADS-CoV (S) połączony z ludzką domeną Fc IgG w celu wytworzenia rekombinowanego bakulowirusa i eksprymowany w komórkach HEK 293F.Białko S-Fc jest oczyszczane żywicą z białkiem G i zachowuje reaktywność z przeciwciałami anty-ludzkimi Fc i anty-SADS-CoV.Następnie wykorzystano białko S-Fc do opracowania pośredniego testu ELISA (S-iELISA) i optymalizacji warunków reakcji S-iELISA.W rezultacie, analizując wartość OD450nm 40 surowic ujemnych SADS-CoV potwierdzonych testem immunofluorescencyjnym (IFA) i Western blot, ustalono wartość odcięcia na 0,3711.Współczynnik zmienności (CV) 6 surowic SADS-CoV pozytywnych w obrębie serii S-iELISA i pomiędzy nimi był mniejszy niż 10%.Test reaktywności krzyżowej wykazał, że S-iELISA nie wykazuje reaktywności krzyżowej z innymi surowicami świńskimi.Ponadto, w oparciu o wykrycie 111 próbek surowicy klinicznej, ogólny wskaźnik koincydencji IFA i S-iELISA wyniósł 97,3%.Test neutralizacji wirusa z 7 różnymi wartościami OD450nm surowicy wykazał, że wartość OD450nm wykryta przez S-iELISA była dodatnio skorelowana z testem neutralizacji wirusa.Na koniec przeprowadzono S-iELISA na 300 próbkach surowicy z hodowli świń.Komercyjne zestawy innych enterowirusów świń wykazały, że wskaźniki IgG dodatnich dla SADS-CoV, TGEV, PDCoV i PEDV wynosiły odpowiednio 81,7%, 54% i 65,3%., odpowiednio 6%.Wyniki pokazują, że S-iELISA jest specyficzna, czuła i powtarzalna i może być stosowana do wykrywania infekcji SADS-CoV w przemyśle trzody chlewnej.Ten artykuł jest chroniony prawem autorskim.Wszelkie prawa zastrzeżone.
Czas publikacji: 22 czerwca-2021